Isolation and Partial Characterization of Potential Melanoma Suppressor Genes Using a Novel Subtractive Melanocyte Library


Victor A. Tron,* Martin J. Trotter,* and Vincent C. Ho**

Abstract

Background: There is increasing evidence that a tumour suppressor plays a role in the pathogenesis of cutaneous melanoma.

Objective: Our objective was to isolate a melanoma-tumour suppressor gene.

Methods: We constructed a novel subtractive library enriched for cDNAs expressed preferentially in normal melanocytes. Candidate genes were isolated using differential hybridization and were characterized further by Northern blot analysis.

Results: Initially, 238 plaques were isolated, of which 57 contained insert cDNA. Ten of the cDNA clones demonstrated expression in normal melanocytes and were not present in at least one of four melanoma cell lines. Three of the clones showed no expression in melanocytes, but did hybridize with at least one of the melanoma lines. The remaining 44 clones were not expressed in either melanocyte or melanoma lines. Partial DNA sequence analysis of four selected clones revealed a cDNA representing the Ret Fused Gene (RFG) and two others highly homologous to tyrosinase-related protein (TRP1). Ret Fused Gene, a gene originally isolated from thyroid gland tumours, has been mapped to chromosome 10, whereas the TRP1 has been mapped to chromosome 9p. Both these genetic loci are known to be altered in melanoma.

Conclusion: The method used is a powerful tool for the identification of genes important in the pathogenesis of skin diseases and is applicable to the study of a wide range of neoplastic and nonneoplastic conditions.

Sommaire

Antécédents: Il semble de plus en plus évident qu'un suppresseur de tumeur joue un rôle dans la pathogenèse des mélanomes cutanés.

Objectif: Notre but était d'isoler un gène suppresseur de mélanome.

Méthodes: Nous avons constitué une nouvelle collection soustractive enrichie pour les cADN que l'on retrouve de préférence dans les mélanocytes normaux. Les gènes choisis ont été isolés par hybridation différentielle et caractérisés par la technique de transfert de Northern blot.

Résultats: À l'origine, on a isolé 238 plaques; de ce nombre, 57 contenaient des cADN. Dix des clones de cADN se sont exprimés dans les mélanocytes normaux et n'étaient pas présents dans au moins une des quatre lignées cellulaires de mélanomes. Trois des clones se sont exprimés dans les mélanocytes, mais se sont hybridés avec au moins une lignée de mélanomes. Les 44 clones restant ne se sont exprimés ni dans les lignées de mélanocytes, ni dans les lignées de mélanomes. Une analyse de séquence d'ADN partielle de quatre clones choisis a révélé un cADN représentant le gène Rex Fused (RFG) et deux autres très semblables à la protéine liée au tyrosinase (TRP1). Le RFG, un gène isolé à l'origine à partir de tumeurs de la glande thyroïde, a été relié au chromosome 10, alors que le TRP1 a été relié au chromosome 9p. On sait que ces deux loci génétiques sont modifiés dans les mélanomes.

Conclusion: La méthode utilisée s'avère un outil efficace pour identifier les gènes importants dans la pathogenèse de maladies de la peau et s'applique à l'étude d'une vaste gamme de maladies néoplasiques et non-néoplasiques.

Submitted 10/23/96. Accepted for publication 11/19/96.

Department of Pathology* and Division of Dermatology**, Vancouver Hospital and Health Sciences Centre and Skin Cancer Research Laboratory, British Columbia Cancer Research Centre, University of British Columbia, Vancouver, British Columbia

This work was supported by the Medical Research Council of Canada, and the Leo Laboratories Research Foundation.

Reprint requests: Victor Tron, MD, Department of Pathology, Vancouver Hospital and Health Sciences Centre, 910 West 10th Avenue, Vancouver, BC, Canada V5Z 1L8

Full text available in the print edition / Pour le texte intégral veuillez consulter la version imprimée.


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